ABclonal MultiF Seamless Assembly是一种简单、快速且高效的DNA无缝克隆技术,可将插入片段定向克隆至任意载体的任意位点。将载体进行线性化,在插入片段正/反向PCR引物5’端引入线性化载体的末端序列,使得PCR产物5’和3’最末端分别带有和线性化载体两末端一致的同源序列(Overlaps, 15-25 bp)。这种两端带有载体末端序列的PCR产物和线性化载体按一定比例混合后,在特定酶混合物的催化下,50℃反应15-60 min即可进行转化,完成定向克隆。
ABclonal MultiF Seamless Assembly Mix作为新一代的无缝克隆试剂,针对多片段无缝组装反应进行了优化,可以一次实现多至5个插入片段的特定顺序组装克隆。使用该试剂,无需考虑插入片段自身携带的酶切位点。2X预混液包含高度优化的反应缓冲液和增强的酶混合物,可显著提高片段的无缝组装效率与对杂质的耐受度,使得线性化载体与插入片段不进行纯化直接用于无缝克隆成为可能,极大地简化了实验步骤。无缝组装后的产物是完全封闭的双链DNA,可直接用于下一步PCR、RCA或其它分子生物学操作(例如转化到感受态细胞)。该方法可成功组装包含15-80 bp末端一致序列的片段,可以组装长达上百kb的DNA片段。
产品特点
快速简便:省略酶切、胶回收、酶连接等步骤,大约1h完成克隆;
高效率:阳性克隆率高;
高通量:一次实现至多5个插入片段组装克隆;
灵活性:多种载体任意位置克隆;
可靠:预混合即用型试剂,过程简单,保证了精确性和可重复性;
应用 | 无缝克隆,快速克隆,高通量克隆,DNA点突变。 |
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产品组分 |
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保存温度 | -20°C |