产品描述

ECL化学发光超敏显色试剂盒用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶（HRP）的抗体及其关联的抗原。其原理是，蛋白质或核酸在电泳后转移到印迹膜上，以一抗及HRP标记的二抗结合膜上的目的蛋白，或以HRP标记的探针直接或间接结合膜上的核酸。洗膜后用本产品配制的ECL工作液，室温孵育膜数分钟，将印迹膜用保鲜膜包被粘贴固定于X光片曝光暗盒。然后转入暗室将X光胶片压在膜上曝光数秒到数小时，显影定影后蛋白质或核酸条带可清晰显示在X光胶片上。

本试剂盒采用了独特的发光底物系统，ECL化学发光超敏显色试剂盒是目前最灵敏的商业化荧光ECL检测试剂。

产品特点

1）具有极高灵敏度和高信噪比，可检测低皮克级抗原；

2）发光迅速，亮度强，可在日光灯下观察到印迹膜条带；

3）持续发光时间长，荧光可使X光胶片感光达5小时以上，特别适用于痕量蛋白或核酸检测；

4）可使用更高的抗体稀释倍数(1∶2000～1∶10000)，大大节省抗体。

产品组分

运输与保存方法

冰袋（wet ice）运输。产品4ºC避光保存，有效期一年。

操作方法

1. 执行常规电泳、转膜、HRP标记抗体或者HRP标记核酸探针孵育、洗膜。

【注】：ECL发光液是HRP的显色底物，因此检测系统最终必须基于HRP酶标记抗体或者核酸探针。
2. 最后一次洗膜的同时，新鲜配制发光工作液：分别取等体积的A液和B液，混匀后，室温放置备用。
【注】：建议立即使用工作液，室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。
3. 用平头镊取出膜，搭在滤纸上沥干洗液，勿使膜完全干燥。将膜完全浸入发光工作液（125μL发光工作液/cm2膜）中，与发光工作液充分接触。室温孵育3分钟，准备立即压片曝光。
【注】：孵育时间过长不会增加灵敏度，有时还会导致曝光条带异常。发光过程的本质是酶促反应，使用过少的发光工作液不利反应进行，也会导致膜上条带曝光不均和明显降低灵敏度。为达节约目的可将膜剪小，但勿降低发光液使用比例。
4. 用镊子夹起膜，搭在滤纸上沥干发光工作液。但勿洗去发光液。
5. 在X光胶片暗盒内表面铺一张面积大于膜的保鲜膜。将印迹膜贴在保鲜膜上，将保鲜膜折起来完全包裹印迹膜，去除气泡和皱褶，可剪去边缘部多余的保鲜膜。用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖印迹膜的保鲜膜固定在暗盒内，蛋白带面向上。

6. 暗房内压X光胶片，分别曝光不同的时间，如数秒到数分钟。显影冲洗。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）步骤1~5可在日光灯下操作；但发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低，移到暗房操作可避免。戴手套可以避免在膜上留下手印，保持膜的干净。

3）长时间曝光或蛋白过量，将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带模糊。
4）发光工作液孵育约3分钟后膜上的条带发光。强条带发光在暗房中肉眼可见，低丰度蛋白条带发光较弱甚至肉眼不可见但可使X光胶片曝光。不能简单以肉眼观察判断条带发光时间。肉眼不可见的荧光实际上可持续数小时并使X光胶片感光，因此弱带可曝光1~10小时。如果曝光后条带不佳，可用洗膜缓冲液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用ECL发光和曝光。
5）由于超敏发光液极其灵敏，强烈推荐大多数进口抗体起始浓度为一抗1∶1000~1∶4000，二抗1∶2000~1∶5000。抗体浓度过高将造成高背景或没有条带，导致失败。
6）某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光，应选择高质量保鲜膜。

7）使用肉眼可见的预染色蛋白Marker和荧光-放射自显影曝光标签可精确确定胶片上条带的位置和大小。

8）叠氮化钠（NaN3）能抑制HRP活性，若回收HRP标记探针或者抗体应避免使用NaN3，如必需使用勿超过0.01%。

9）本品无特殊毒性，按普通化学品处理。
10）本产品仅作科研用途！

HB200701